杂志名称:  Cytokine  （IF  2.874）

文献题目：

Sugitharini V, Pavani K, PremaA, et al. TLR-mediated inflammatory response to neonatal pathogens andco-infection in neonatal immune cells[J]. Cytokine, 2014, 69(2): 211-217.

本实验所用产品：RayBiotech人AAH-INF-3抗体膜芯片

（40个炎症因子抗体芯片）

实验样品：细胞培养上清

 研究背景:

     新生儿主要依靠先天免疫系统抵抗入侵病原体，TLRs如同天然免疫的眼睛，监视与识别各种不同的疾病相关分子模式（PAMP），是机体抵抗感染性疾病的第一道屏障。在机体对入侵病原体发起炎症反应中TLRs起到关键作用。新生儿最常见的感染病原体有大肠杆菌，肺炎杆菌和金黄色葡萄球菌。多种病原体共感染在新生儿败血症上很常见。本文旨在研究TLR2 和TLR4介导的新生儿对病原体的炎症反应。

本研究用LPS，PGN，大肠杆菌，肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌刺激脐带血单核细胞， 分析CD¹⁴⁺CD¹⁶⁺和 CD^14dimCD¹⁶⁺ 细胞表面TLR2 和TLR4的表达，以及比较脐带血与外周血的炎症反应的不同。结果发现TLR2和TLR4在两个单核细胞亚群中表达不同，新生儿细胞能够和成年人细胞一样分泌相似水平的促炎症因子IL6、IL1b和抗炎症因子IL10、IL13。IL23和MCP-1在CBMCs（脐带血单核细胞）表达低于PBMCs（外周血单核细胞），IL8则相反。炎症因子抗体芯片结果显示多个细胞因子在LPS和PNG共感染细胞时候表达降低，结果表明，TLRs介导的炎症反应会根据入侵病原体的不同而产生不同的响应。

研究思路

1 样品准备

l  脐带血单核细胞（CBMCs）

l  外周血单核细胞（PBMCs）

l  LPS, PGN 和LPS + PGN药物刺激后收取上清检测

2  单核细胞亚群数目在不同病原体刺激后发生变化

3 TLR2 和TLR4在两个单核细胞亚群中表达不同

4ELISA检测比较PBMCs与CBMCs 炎症因子的表达水平

新生儿细胞能够和成年人细胞一样分泌相似水平的促炎症因子IL6、IL1b和抗炎症因子IL10、IL13。IL23和MCP-1在CBMCs（脐带血单核细胞）表达低于PBMCs（外周血单核细胞），IL8则相反。

5  RayBiotech抗体芯片筛查PBMCs与CBMCs在感染与共感染炎症、趋化因子表达水平变化

RayBiotech抗体芯片AAH-INF-3筛选PBMCs与CBMCs在LPS, PGN分别感染与共感染后，细胞上清中炎症、趋化因子表达水平变化，结果显示，IL6、IL8、MCP-1在共感染细胞中表达明显增高。更有趣的发现是GM-CSF, MIP-1a ，MIP-1b, IL-10, TNF-a ,RANTES, IL-6, IL-8, MCP-1在PBMCs共感染细胞上清中表达明显增高。

结论：RayBiotech芯片的结果显示PGN感染PBMCs与CBMCs比LPS感染引起的炎症反应弱，共感染引起的炎症反应最大。论文揭示新生儿免疫细胞对不同的病原体感染产生不同响应。尽管新生儿单核细胞在病原体感染后能够通过TLR2和TLR4激活强大的炎症反应，但是在共感染的时候不能够像成熟细胞一样产生更多的细胞因子，说明新生儿单核细胞的功能不成熟。 RayBiotech芯片在该机制研究中发挥了重要的作用。