惊掉下巴！蛋白多因子检测技术的真相大揭秘
2024-08-13 18:19 by admin
蛋白多因子检测
蛋白质多因子检测已经是一种常用于生物学研究的科学研究技术，能够同时对单个样本中的多个微量表达功能性蛋白质进行定量或者定性，结合高通量上样技术，可以实现一次实验对多个样本中的多个指标进行检测。
省时 省力 省人工 省经费
利用蛋白质多因子检测，我们单次实验也可以获得与质谱一样的组学级别的数据，通过各组比较，我们能获得组间的差异因子有哪些，结合数据库富集分析，我们可以获得与研究相关的分子功能，疾病、信号通路相关的上下游联系。
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蛋白多因子检测的应用
在生物学研究，对样本中多个功能性靶标表达量同时分析，可以获得实验样本整体的炎症、趋化、免疫等分子机制、信号转导功能、磷酸化程度等，在整个研究项目的上游方案拟定或者下游结果验证都可使用。
在临床医学、中医药学、药学、流行病学研究中，针对疾病诊断治疗的科学研究中，与生物学研究类似，利用蛋白质多因子检测技术结合大队列能快速进行疾病的诱发机制研究、关键标志物筛选、治疗药物筛选、治疗方案优化等。
在功能性食品、环境、生物材料等与人类健康改善、寿命延长相关的研究领域中蛋白质多因子评估也有很重要的作用，检测不同实验组的微量功能性蛋白质表达水平从而评估研发的产品功效。
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蛋白多因子检测技术的优势
除了明显的检测指标数量优势，与传统的单靶标检测技术例如WB、ELISA相比，蛋白多因子检测技术具有相当多的优势！
（1）操作简单，无需特殊处理，无需高温煮沸，无需特殊仪器，以RayBio多因子检测技术（抗体芯片）为例：
①样本处理：血清、血浆样本制备只需简单稀释，细胞、组织等样本只需简单破碎裂解无需煮沸；
②实验步骤：将样本孵育至预包被的蛋白质捕获抗体芯片上，到时间清洗、添加二抗、显色底物，上机检测荧光（是不是和ELISA一样简单）。
③常规做过WB的实验室即可满足多因子检测实验需求，无需购买额外试剂、耗材、仪器！
（2）样本需求量少，单次上样量低至10μL即可检测20+个因子！
（3）样本兼容性高，除了常规的血清、血浆、细胞裂解物等样本，在科研中取得的灌洗液、组织冲洗液、尿液、乳汁等都能作为检测样本，并且已经有很多成功案例。
（4）灵敏度高，利用与ELISA相同的抗原抗体结合原理，采用与生产ELISA试剂盒同样的抗体进行芯片包被，对样本的检测灵敏度可达pg级别。
（5）稳定性高， 以rayplex流式多因子检测试剂盒为例，在精准度评估中，一个试剂盒中检测的所有因子的CV值都能在7%以下。
技术原理
目前，蛋白质多因子检测技术已经有非常多的专利申请，但是灵敏度高的技术还是需要依靠抗原抗体的特异性识别为基础，下面介绍的几种技术就是目前市面上开发的高灵敏多因子检测技术试剂盒常用的实验方法：
双抗夹心：将所有检测靶标的捕获抗体按照一定顺序包被在修饰后的载玻片或NC膜上，与样本中对应靶标结合后，再结合检测抗体，激发HRP底物或者是CY3的荧光，通过荧光强度进行多因子的定量。
流式微球技术：结合双抗夹心法的免疫分析技术将捕获抗体包被在不同尺寸及荧光（如：APC）强度的流式微珠上检测抗体携带另一种荧光（如：PE），对样本进行孵育后，使用标准流式细胞仪平台对液体样本中多种可溶性蛋白进行一次性定量分析。
标记法：直接对样本中蛋白质进行生物素标记，与预包被的一抗进行结合后激发HRP底物或者是CY3的荧光进行多因子半定量检测。
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